Le test repose sur le principe de la « capture des IgM », selon lequel les anticorps de classe IgM présents dans l'échantillon sont d'abord capturés par la phase solide recouverte d'anticorps anti-IgM.
Après élimination par lavage de tous les autres composants de l'échantillon, et en particulier des anticorps IgG, lors de la deuxième incubation, les IgM anti-CMV liées sont détectées par l'ajout d'un complexe composé d'antigènes CMV natifs et d'anticorps monoclonaux spécifiques du CMV, marqués à la peroxydase (HRP).
Après incubation, les micropuits sont lavés pour éliminer le conjugué non lié, puis le chromogène/substrat est ajouté. En présence de conjugué lié, le substrat incolore est hydrolysé en un produit final coloré, dont la densité optique peut être détectée et est proportionnelle à la quantité d'anticorps IgM anti-cytomégalovirus présents dans l'échantillon.