L'antigène HDV, s'il est présent dans l'échantillon, est capturé par un anticorps monoclonal spécifique lors de la première incubation. Un détergent est ajouté à l'échantillon afin de dissoudre l'antigène spécifique des particules HDV.
Lors de la deuxième incubation, après lavage, un traceur, composé d'un deuxième anticorps anti-antigène HDV marqué à la peroxydase (HRP), est ajouté à la microplaque et se lie à l'antigène HDV capturé.
La concentration de l'enzyme liée en phase solide est proportionnelle à la quantité d'antigène HDV dans l'échantillon et son activité est détectée par l'ajout du chromogène/substrat lors de la troisième incubation.