Le test est basé sur le principe de la compétition où les anticorps dans l’échantillon entrent en compétition avec un anticorps spécifique anti-HAV, étiqueté avec HRP, pour une quantité fixe d’antigène sur la phase solide.
Un HAV purifié et inactivé est appliqué sur les micropuits. Le sérum/plasma du patient est ajouté au puits microscopique et les anticorps contre le VHA sont capturés par la phase solide. Après lavage, le conjugué enzymatique est ajouté et se lie à l’antigène HAV libre, s’il est encore présent.
La plaque est lavée pour éliminer le conjugué non lié, puis le chromogène/substrat est ajouté. En présence de peroxydase, le substrat incolore est hydrolysé en un produit final coloré dont la densité optique peut être détectée et qui est inversement proportionnelle à la quantité d’anticorps anti-VHA présents dans l’échantillon.
Un additif est ajouté à l’échantillon directement dans le puits pour bloquer les interférences capables de masquer la présence d’anticorps, apparaissant principalement lors du suivi de la vaccination.