Les microplaques sont recouvertes d’antigènes spécifiques du VHC dérivés des régions « core » et « ns » codant pour des déterminants antigéniques conservateurs et immunodominants (peptide Core, peptides recombinants NS3, NS4 et NS5).
La phase solide est d'abord traitée avec l'échantillon dilué et les anticorps anti-VHC, s'ils sont présents, sont capturés par les antigènes.
Après élimination par lavage de tous les autres composants de l'échantillon, lors de la deuxième incubation, les anticorps anti-VHC liés, tant IgG qu'IgM, sont détectés par l'ajout d'anticorps polyclonaux spécifiques anti-IgG et anti-IgM, marqués à la peroxydase (HRP).
L'enzyme capturée sur la phase solide, agissant sur le mélange substrat/chromogène, génère un signal optique proportionnel à la quantité d'anticorps anti-VHC présents dans l'échantillon.
Une valeur seuil permet d'interpréter les densités optiques en résultats négatifs et positifs pour les anticorps anti-VHC.