Après lavage, les anticorps capturés sont détectés par un HBsAg marqué à la peroxydase (HRP), qui se lie spécifiquement au deuxième site de liaison disponible de ces anticorps.
L'enzyme, spécifiquement liée aux puits, agit sur le mélange substrat/chromogène et génère un signal optique proportionnel à la quantité d'HBsAb dans l'échantillon, qui peut être détecté par un lecteur ELISA.
La quantité d'anticorps peut être quantifiée à l'aide d'une courbe étalonnée par rapport à la préparation de référence de l'OMS.
Les échantillons sont prétraités dans le puits avec un diluant capable de bloquer les interférences présentes chez les personnes vaccinées.