Le test repose sur le principe de la compétition, selon lequel les anticorps présents dans l'échantillon entrent en compétition avec un anticorps monoclonal pour une quantité fixe d'antigène sur la phase solide.
Un HBcAg recombinant purifié est couché sur les micropuits. Le sérum/plasma du patient est ajouté au micropuits avec un additif capable de bloquer les interférences présentes dans l'échantillon.
Lors de la deuxième incubation après lavage, un anticorps monoclonal, conjugué à de la peroxydase de raifort (HRP) et spécifique de l'HBcAg, est ajouté et se lie à l'HBcAg recombinant libre enrobé sur le plastique.
Après incubation, les micropuits sont lavés pour éliminer tout conjugué non lié, puis le chromogène/substrat est ajouté.
En présence de l'enzyme peroxydase, le substrat incolore est hydrolysé en un produit final coloré.
L'intensité de la couleur est inversement proportionnelle à la quantité d'anticorps anti-HBcAg présents dans l'échantillon.